10 resultados para Reação em cadeia da polimerase - Teses
em Repositório Institucional da Universidade de Aveiro - Portugal
Resumo:
The introduction of chemicals into the environment by human activities may represent a serious risk to environmental and human health. Environmental risk assessment requires the use of efficient and sensitive tools to determine the impact of contaminants on the ecosystems. The use of zebrafish for the toxicity assessment of pharmaceuticals, drugs, and pollutants, is becoming well accepted due to zebrafish unique advantages for the screening of compounds for hazard identification. The aim of the present work is to apply toxicogenomic approaches to identify novel biomarkers and uncovered potential modes of action of classic and emergent contaminants able to disrupt endocrine systems, such as the Retinoic Acid Receptor, Retinoid X Receptor and the Aryl Hydrocarbon Receptor. This study relies on different nuclear and cytosolic protein receptors and other conditional (ligand- or stress- activated) transcriptional factors that are intimately involved in the regulation of defensome genes and in mechanisms of chemical toxicity. The transcriptomic effects of organic compounds, endogenous compounds, and nanoparticles were analysed during the early stages of zebrafish development. Studying the gene expression profiles of exposed and unexposed organisms to pollutants using microarrays allowed the identification of specific gene markers and to establish a "genetic code" for the tested compounds. Changes in gene expression were observed at toxicant concentrations that did not cause morphological effects. Even at low toxicant concentrations, the observed changes in transcript levels were robust for some target genes. Microarray responses of selected genes were further complemented by the real time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) methodology. The combination of bio-informatic, toxicological analyses of differential gene expression profiles, and biochemical and phenotypic responses across the treatments allowed the identification of uncovered potential mechanisms of action. In addition, this work provides an integrated set of tools that can be used to aid management-decision making by improving the predictive capability to measure environmental stress of contaminants in freshwater ecosystems. This study also illustrates the potential of zebrafish embryos for the systematic, large-scale analysis of chemical effects on developing vertebrates.
Resumo:
A carne continua a ser a fonte proteica mais comum no quotidiano das pessoas. Alm disso, os produtos crneos processados apresentam-se como uma mais-valia nas suas vidas agitadas. Este tipo de produto torna difcil a diferenciao das carnes utilizadas na sua confeco, sendo por isso propcios a adulterao. A Reaco em Cadeia da Polimerase (PCR) tem ganho cada vez mais importncia nos laboratrios de biologia molecular, revelando-se uma tcnica de anlise rpida, sensvel e altamente especfica na identificao de espcies em produtos alimentares. No entanto, vrios factores podem interferir com o processo de amplificao, pelo que alguns cuidados devem ser implementados desde a aquisio da amostra a analisar, ao seu acondicionamento e posterior extrao de ADN. Existem inmeros protocolos de extrao de ADN, devendo para cada estudo avaliar-se e optar-se pelo mais adequado, considerando a finalidade estabelecida para a amostra extrada. O trabalho laboratorial apresentado nesta dissertao baseou-se em trs etapas principais. Inicialmente, avaliaram-se diferentes protocolos de extrao de ADN, utilizando-se amostras de carne adquiridas num talho. Entre os protocolos testados, o mtodo de Brometo de Cetil-Trimetil-Amnio (CTAB) modificado foi o que permitiu obter amostras de ADN com maior concentrao e elevado nvel de pureza. Posteriormente, foram testados e optimizados diferentes protocolos de amplificao, por PCR em tempo real, para a deteco das espcies Bos taurus (vaca), Sus scrofa (porco), Equus caballus (cavalo) e Ovis aries (ovelha). Foram empregues primers especficos de espcie para a deteco de genes mitocondriais e genmicos, consoante cada protocolo. Para o caso concreto do porco, foi efectuada a avaliao de dois protocolos, singleplex com EvaGreen e tetraplex com AllHorse, para possvel aplicao dos mesmos na sua quantificao. Os resultados demonstraram elevada especificidade e sensibilidade das reaces para esta espcie, permitindo a sua deteco at um limite de 0,001 ng e 0,1%, respectivamente. Somente a primeira metodologia se mostrou adequada para quantificao. Por ltimo, as metodologias sugeridas foram aplicadas com sucesso na anlise de 4 amostras comerciais de hambrgueres, tendo-se verificado a consistncia da rotulagem em todos os casos, no que concerne a composio em termos de espcies animais. O interesse de trabalhos neste mbito recai na importncia da autenticidade dos rtulos de produtos alimentares, principalmente nos produtos crneos, para segurana dos consumidores e salvaguarda dos produtores.
Resumo:
A fosforilao reversvel de protenas um importante mecanismo de controlo em eucariotas. A fosfoprotena fosfatase 1 (PPP1) uma fosfatase de serina/treonina envolvida em vrios processos celulares. Existem trs isoformas da subunidade cataltica (/CA, //CB e /CC) com pequenas diferenas nos terminais amino e carboxlico. O gene PPP1CC sofre ainda splicing alternativo para produzir duas isoformas, a PPP1CC1 ubqua e a PPP1CC2 enriquecida em testculo e especfica de esperma. A localizao e especificidade de substratos da PPP1 est dependente da formao de complexos oligomricos com protenas que interagem com a PPP1 (PIPs). O objetivo principal desta tese foi estudar novas PIPs, especficas de testculo e esperma, a fim de melhor caracterizar o papel desta fosfatase e dos respetivos complexos na reproduo em mamferos. Com este fim, estudou-se a presena, localizao e possveis funes de uma PIP previamente conhecida, PPP1R2, e de duas novas PIPs, PPP1R2P3 e Tctex1d4. PPP1R2 e PPP1R2P3 esto presentes em esperma humano colocalizando com a PPP1CC2, na cabea e na cauda. A hiptese que as holoenzimas localizadas na cabea tero um papel na reação acrossmica, enquanto que as holoenzimas presentes no axonema so relevantes para o controlo da motilidade flagelar. De seguida foram estudados os pseudogenes da PPP1R2, em termos de histria evolutiva e de possveis funes. Na espcie humana, a PPP1R2 tem 10 pseudogenes, 7 deles especficos de primatas. Estudos de bioinformtica e dados de expresso mostram que os PPP1R2P1/P3/P9 so os pseudogenes com maior probabilidade de serem transcritos e traduzidos. Tambm identificmos o PPP1R2P9 em esperma humano e mostrmos que alguns pseudogenes podero estar associados a estados fisiopatolgicos. Isto indica que o processo de evoluo poder estar ligado formao de novos genes ou ao controlo do mRNA da PPP1R2. A sobre-expresso da PPP1R2 ou PPP1R2P3 em testculo de ratinho tambm foi realizada, para caracterizar os mecanismos envolvidas na funo dos complexos PPP1R2/PPP1R2P3-PPP1CC2 na espermatognese e fisiologia dos espermatozoides. A dinena de cadeia leve, Tctex1d4, foi encontrada como interagindo com a PPP1C e como estando presente em testculo de ratinho e em esperma humano. Demonstrmos que a Tctex1d4 e a PPP1 colocalizam no centro organizador de microtbulos e nos microtbulos e que o motivo de ligao PPP1 presente na Tctex1d4 parece ser importante para manter a PPP1 no centro organizador de microtbulos e/ou para disromper ou atrasar o seu movimento ao longo dos microtbulos emergentes. Estes resultados abrem novos caminhos para os possveis papis do complexo Tctex1d4-PPP1 na dinmica dos microtbulos, motilidade do esperma, reação acrossmica e na regulao da barreira hemato-testicular, provavelmente, atravs da via de sinalizao do TGF. A anlise do motivo de ligao PPP1 mostra que este altamente conservado entre os mamferos, com exceo das Pikas, sugerindo que esta perda aconteceu antes da radiao das Pikas, h 6-20 milhes de anos atrs. Atravs de um rastreio por mutaes demonstrmos que a capacidade da Tctex1d4 se ligar PPP1 mantida nas Pikas, embora o motivo de ligao PPP1 esteja disrompido. Este estudo abre portas para novas descobertas na rea da reproduo mostrando o papel da PPP1CC2 na espermatognese e fisiologia do esperma.
Resumo:
A crescente procura de recursos fosseis a que se tem assistido nos ultimos anos, tem resultado num crescimento sem precedentes dos precos, com consequencias imprevisiveis e que levara, no espaco de decadas, ao seu inevitavel esgotamento. A procura de um modelo de desenvolvimento sustentavel, baseado em recursos renovaveis e o grande desafio que se coloca a civilizacao no seculo XXI. A biomassa vegetal, atraves das designadas gBio-refinarias h, e uma alternativa logica para a producao de produtos quimicos e de materiais mas tambem de combustiveis e energia. Os oleos vegetais constituem uma das fracoes da biomassa vegetal, cuja exploracao tem merecido redobrada atencao nos ultimos anos, como fonte de materiais e de combustiveis. Assim, a presente dissertacao tem por objetivo o desenvolvimento de novos materiais polimericos derivados de oleos vegetais, seguindo duas abordagens distintas, nomeadamente a preparacao de polimeros atraves de polimerizacao por etapas e polimerizacao em cadeia (Parte B e C, respetivamente). Em primeiro lugar, foram sintetizados poliesteres alifaticos de cadeia longa a partir de monomeros provenientes do oleo de colza (Capitulo III). A auto-metatese do acido erucico com catalisadores de rutenio, seguida de hidrogenacao da ligacao dupla, originou o acido 1,26-hexacosanodioico, que por sua vez foi convertido em hexacosano-1,26-diol. Subsequentemente, a policondensacao do acido ,-dicarboxilico de cadeia longa com o hexacosano-1,26-diol originou o poliester 26,26. O diacido C26 foi tambem polimerizado com outros alcano-diois de cadeia curta, nomeadamente o dodecano-1,12-diol e o butano-1,2-diol, produzindo, respetivamente, os poliesteres 12,26 e 4,26. Estes poliesteres de fontes 100% renovaveis possuem valores de Mn na ordem dos 8-14 kDa e valores de PDI entre 2.1 e 2.7. As propriedades destes poliesteres alifaticos foram avaliadas atraves de varias tecnicas, revelando elevada cristalinidade (com uma estrutura cristalina como a do polietileno) e elevadas temperaturas de fusao (74-104 C), cristalizacao (68-92 C) e degradacao (323-386 C). Em segundo lugar, foram sintetizados polimeros lineares termo-reversiveis a partir de derivados do oleo de ricinio (Capitulo IV). Para tal foram preparados monomeros que incorporam aneis furanicos inseridos atraves do acoplamento tiol-eno, e que posteriormente foram polimerizados pela reacao de Diels-Alder (DA) entre os grupos furano (dieno A) e estruturas complementares do tipo maleimida (dienofilo B). Para as polimerizacoes DA foram consideradas duas abordagens diferentes, nomeadamente (i) o uso de monomeros com dois aneis furanicos terminais em conjunto com uma bismaleimida (sistemas AA+BB) e (ii) a utilizacao de um monomero que incorpora ambos os grupos reativos, furano e maleimida, na sua estrutura (sistema AB). Este estudo demonstrou claramente que ambas as estratgias foram bem sucedidas embora com diferentes resultados em termos da natureza dos produtos obtidos. Estes polmeros lineares apresentam valores relativamente baixos de Tg (-40 to -2 C) devido natureza flexvel dos grupos separadores das funes reativas, e de Mn (4.5-9.0 kDa) dada a observada tendncia de ciclizao associada a concentraes baixas de monmero. A aplicao da reação de retro-DA aos polmeros em causa confirmou o seu carter reversvel, ou seja, a possibilidade de promover, em condies controladas, a despolimerizao com recuperao dos monmeros de partida. Esta particularidade abre caminhos para materiais macromoleculares originais com aplicaes promissoras tais como auto-reparao e reciclabilidade. Em terceiro lugar, sintetizaram-se polmeros no-lineares termo-reversveis a partir de derivados do leo de ricnio (Captulo V). Para tal foram preparados monmeros trifuncionais e posteriormente polimerizados atravs da reação de DA entre os grupos reativos complementares furano/maleimida. Foram consideradas trs abordagens distintas para preparar estes polmeros no-lineares, nomeadamente atravs da utilizao de (i) um monmero bisfurnico em combinao com uma trismaleimida (sistema A2+B3) e (ii) um monmero trisfurnico em conjunto com uma bismaleimida (sistema A3+B2) que originaram materiais ramificados ou reticulados, e ainda (iii) a utilizao de monmeros assimetricamente substitudos do tipo A2B ou AB2 capazes de originar estruturas macromoleculares hiper-ramificadas. Todos os sistemas apresentaram valores de Tg perto de 0 C, o que era de esperar para estes materiais no-lineares. A aplicao da reação de retro-DA comprovou mais uma vez o carter termo-reversvel das polimerizaes em causa. Em quarto lugar e ltimo lugar, foram preparados copolmeros de acetato de vinilo (VAc) com monmeros derivados de leo de girassol (Captulo VI). steres vinlicos de cidos gordos (FAVE) foram sintetizados por transvinilao dos cidos oleico e linoleico com VAc catalisada por um complexo de irdio. Os monmeros vinlicos preparados foram caracterizados e posteriormente homopolimerizados e copolimerizados com VAc atravs do uso dos grupos vinlicos terminais como funo inicial de polimerizao. A variao do tipo e quantidade de monmero FAVE e da quantidade de iniciador radicalar originou copolmeros de VAc com valores de Mn na gama de 1.2-3.0 kDa e valores de Tg de -5 a 16 C. Os copolmeros foram avaliados em testes de cura oxidativa atravs das insaturaes nas suas cadeias alifticas para formar materiais reticulados, e os resultados sugerem que eles podem ser sistemas efetivos de cura para aplicaes como tintas, vernizes e outros tipos de revestimento. Todos os materiais polimricos preparados ao longo deste trabalho constituem contribuies atrativas para a rea dos polmeros oriundos de recursos renovveis e representam uma prova indiscutvel de que os leos vegetais so percursores promissores de materiais macromoleculares com potenciais aplicaes.
Resumo:
A reação entre o xido de magnsio (MgO) e o fosfato de monoamnio (MAP), temperatura ambiente, origina os cimentos de fosfato de magnsio, materiais caracterizados pela sua presa rpida e pelas excelentes propriedades mecnicas adquiridas precocemente. As propriedades finais so dependentes, essencialmente, da composio do cimento (razo molar magnsia:fosfato e utilizao de retardantes de presa) mas tambm so influenciadas pela reatividade da magnsia utilizada. Neste trabalho, a reação foi caracterizada atravs do estudo da influncia da razo molar MgO:MAP (variando de 1:1 at 8:1), da presena e teor de aditivos retardantes (cido brico, cido ctrico e tripolifosfato de sdio) e da variao da rea superficial especfica da magnsia (conseguida por calcinao do xido), no tempo de presa, na temperatura mxima atingida e nas fases cristalinas finais formadas. A reação de presa pode ser comparada hidratao do cimento Portland, com a existncia de 4 estgios (reação inicial, induo, acelerao e desacelerao), com a diferena que estes estgios ocorrem a velocidade muito mais alta nos cimentos de fosfato de magnsio. Este estudo foi realizado utilizando a espetroscopia de impedncias, acompanhada pela monitorizao da evoluo de temperatura ao longo do tempo de reação e, por paragem de reação, identificando as fases cristalinas formadas. A investigao do mecanismo de reação foi complementada com a observao da microestrutura dos cimentos formados e permitiu concluir que a origem da magnsia usada no afeta a reação nem as propriedades do cimento final. A metodologia de superfcie de resposta foi utilizada para o estudo e otimizao das caractersticas finais do produto, tendo-se mostrado um mtodo muito eficaz. Para o estudo da variao da rea superficial especfica da magnsia com as condies de calcinao (temperatura e tempo de patamar) usou-se o planeamento fatorial de experincias tendo sido obtido um modelo matemtico que relaciona a resposta da rea superficial especfica da magnsia com as condies de calcinao. As propriedades finais dos cimentos (resistncia mecnica compresso e absoro de gua) foram estudadas utilizando o planeamento simplex de experincias, que permitiu encontrar modelos que relacionam a propriedade em estudo com os valores das variveis (razo molar MgO:MAP, rea superficial especfica da magnsia e quantidade de cido brico). Estes modelos podem ser usados para formular composies e produzir cimentos com propriedades finais especficas.
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Both skeletal and cardiac muscles daily burn tremendous amounts of ATP to meet the energy requirements for contraction. So, it is not surprising that the maintenance of mitochondrial morphology, number, distribution and functionality in striated muscle are important for muscle homeostasis. In these tissues mitochondria present the added dimension of two populations, the intermyofibrillar (IMF) and the subsarcolemmal (SS) mitochondria, being IMF the most abundant one. In the present thesis, the molecular mechanisms harboured in mitochondria of striated muscles were studied using animal models, to better comprehend the role of mitochondrial plasticity in several pathophysiological conditions such as aging, diabetes mellitus and bladder cancer. The comparative analysis of IMF and SS populations isolated from heart evidenced a higher respiratory chain activity of mitochondria interspersed in the contractile apparatus. The higher susceptible of SS respiratory chain complexes subunits to carbonylation, but not to nitration, seems to justify the lower respiratory chain activity observed in this mitochondrial population. Our results showed that in heart from aged mice there is an accumulation of dysfunctional mitochondria. The age-related decrease of oxidative phosphorylation activity seems to be justified, at least partially, by the increased proneness of mitochondrial proteins as OXPHOS subunits and MnSOD to oxidative modifications. Moreover, a sedentary lifestyle seems to worsen the functional consequences of aging in heart by increasing mitochondrial proteins susceptibility to nitration. In skeletal muscle from rats with type 1 diabetes mellitus induced by streptozotocin administration, we verified the accumulation of dysfunctional mitochondria due, at least in part, to the impairment of PQC system. Indeed, the decreased activity of AAA proteases was accompanied by the accumulation of oxidatively modified mitochondrial proteins with impact in respiratory chain activity. The diminishing of mitochondria activity also underlies cancer-induced muscle wasting. Indeed, using a rat model of chemically induced urothelial carcinoma we verified that the loss of gastrocnemius mass was related to mitochondrial dysfunction due to, at least partially, the down-regulation of PQC system involving the mitochondrial proteases paraplegin and Lon. PQC impairment resulted in the accumulation of oxidatively modified mitochondrial proteins. In overall, regardless the pathophysiological stimuli that promote mitochondrial alterations, there are similarities in the pattern of disease-related mitochondrial plasticity. The diminished capacity for ATP production in striated muscle seems to be due to increased oxidative damage of mitochondrial proteins, namely subunits of respiratory chain complexes, metabolic proteins and MnSOD. Our data highlighted, for the first time, the impact of mitochondrial PQC system impairment in the accumulation of oxidized proteins, exacerbating the dysfunction of this organelle in striated muscle in several pathophysiological conditions.
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During the last few decades, Metal-Organic Frameworks (MOFs), also known as Coordination Polymers, have attracted worldwide research attentions due to their incremented fascinating architectures and unique properties. These multidimensional materials have been potential applications in distinct areas: gas storage and separation, ion exchange, catalysis, magnetism, in optical sensors, among several others. The MOF research group at the University of Aveiro has prepared MOFs from the combination of phosphonate organic primary building units (PBUs) with, mainly, lanthanides. This thesis documents the last findings in this area involving the synthesis of multidimensional MOFs based on four di- or tripodal phosphonates ligands. The organic PBUs were designed and prepared by selecting and optimizing the best reaction conditions and synthetic routes. The self-assembly between phosphonate PBUs and rare-earths cations led to the formation of several 1D, 2D and 3D families of isotypical MOFs. The preparation of these materials was achieved by using distinct synthetic approaches: hydro(solvo)thermal, microwave- and ultrasound-assisted, one-pot and ionothermal synthesis. The selection of the organic PBUs showed to have an important role in the final architectures: while flexible phosphonate ligands afforded 1D, 2D and dense 3D structures, a large and rigid organic PBU isolated a porous 3D MOF. The crystal structure of these materials was successfully unveiled by powder or single-crystal X-ray diffraction. All multidimensional MOFs were characterized by standard solid-state techniques (FT-IR, electron microscopy (SEM and EDS), solid-state NMR, elemental and thermogravimetric analysis). Some MOF materials exhibited remarkable thermal stability and robustness up to ca. 400 C. The intrinsic properties of some MOFs were investigated. Photoluminescence studies revealed that the selected organic PBUs are suitable sensitizers of Tb3+ leading to the isolation of intense green-emitting materials. The suppression of the OH quenchers by deuteration or dehydration processes improves substantially the photoluminescence of the optically-active Eu3+-based materials. Some MOF materials exhibited high heterogeneous catalytic activity and excellent regioselectivity in the ring-opening reaction of styrene oxide (PhEtO) with methanol (100% conversion of PhEtO at 55 C for 30 min). The porous MOF material was employed in gas separation processes. This compound showed the ability to separate propane over propylene. The ionexchanged form of this material (containing K+ cations into its network) exhibited higher affinity for CO2 being capable to separate acetylene over this environment non-friendly gas.
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Este trabalho abordou a valorizao de um subproduto da indstria de lacticnios (soro de queijo) atravs da alterao do funcionamento de processos habitualmente utilizados no contexto do tratamento biolgico. Foi avaliada a fermentao acidognica deste subproduto para maximizar a converso do seu elevado teor de matria orgnica em cidos orgnicos volteis (AOV) que actualmente so produtos com elevada procura, nomeadamente para produo de polihidroxialcanoatos (PHA). Em ensaios descontnuos e semi-contnuos foi caracterizada a produo e composio de AOV a partir de soro de queijo variando a razo food-to-microorganism (F/M) e a concentrao de alcalinidade. Recorrendo modelao dos resultados atravs de superfcies de resposta, demonstrou-se que condies de F/M = 4 gCQO g-1SSV combinadas com uma adio elevada de alcalinidade (8 g L-1 expresso como CaCO3) resultaram na converso de 72% da CQO alimentada em AOV. O acetato e o butirato foram os AOV predominantes (60%), mas elevadas razes F/M combinadas com elevadas alcalinidades promoveram o alongamento da cadeia carboxlica, tendo sido produzidos AOV de maior massa molecular (iso-valerato e n-caproato). O processo de fermentao acidognica foi posteriormente desenvolvido em modo contnuo num reactor MBBR acidognico operado a longo prazo. Cargas orgnicas entre 30 e 50 gCQO L-1d-1 permitiram obter um grau de acidificao mximo de 68% no efluente fermentado. Foi ainda demonstrado que uma adio dinmica de alcalinidade (0 4,8 g CaCO3 L-1) nestas condies estimulou a produo de AOV de cadeia mpar (propionato e n-valerato) at 42%. O efluente acidificado no processo anaerbio foi usado como substrato em reactores SBR operados para seleco de culturas microbianas mistas acumuladoras de PHA, nos quais foi aplicado um regime de alimentao dinmica em condies aerbias (fartura-fome). Estes sistemas operaram tambm a longo prazo, e demonstraram ser capazes de remover mais de 96% da CQO alimentada e simultaneamente convert-la em PHA, at 36% do peso celular seco. A velocidade de remoo de substrato (valor mximo de 1,33 gCQO g-1SSV h-1) foi proporcional ao teor de polmero acumulado, evidenciando o estabelecimento de uma fase de fome prolongada que estimulou a seleco de microrganismos com elevada capacidade de acumulao de PHA. Alm disso, o teor molar de hidroxivalerato (HV) no copolmero produzido [P(HB-co-HV)] foi directamente proporcional ao teor de AOV de cadeia mpar (propionato e n-valerato) presente no soro fermentado que serviu de substrato. Uma estratgia de operao do reactor SBR com variao da carga orgnica, aliada ao regime fartura-fome estabelecido, permitiu ainda simular a realidade dos processos de tratamento biolgico de efluentes, nos quais a composio e concentrao inicial de matria orgnica variam frequentemente. Este modo de operao do sistema estimulou notavelmente o processo de seleco de culturas acumuladoras de PHA tendo resultado num aumento da acumulao de PHA de 7% para 36%. Os resultados demonstraram com sucesso a possibilidade de valorizao do soro de queijo atravs de eco-biotecnologia, contribuindo para uma mudana de paradigma no tratamento convencional de efluentes: ao invs de serem eliminados enquanto poluentes, os componentes orgnicos presentes neste subproduto industrial podem assim ser convertidos em materiais de valor acrescentado.
Resumo:
Ao longo da ltima dcada, a crescente preocupao com as ameaas suscitadas pelas mudanas climticas e o esgotamento dos recursos naturais tem-se tornado evidente em diversas indstrias e na populao global. Alm da salvaguarda do ambiente natural, espera-se, das empresas, que respeitem princpios de equidade social nas suas prticas e processos produtivos. Existe uma perceo generalizada de que as empresas e os diversos governos nacionais devem ser mais eficientes na utilizao dos recursos naturais e humanos, de modo a promover um desenvolvimento ambiental, social e econmico equilibrado e sustentvel. Consequentemente, todas as indstrias sero desafiadas a reorganizar as suas cadeias de abastecimento, preservando o ambiente natural e respeitando as comunidades locais. neste contexto que se insere a presente investigao, que visa contribuir para a consolidao da teoria da gesto sustentvel da cadeia de abastecimento. O objetivo geral deste trabalho o de identificar e analisar os fatores que induzem e instigam as empresas implementao de prticas ambientais e sociais, identificar e caracterizar as prticas sustentveis utilizadas e perceber a relao destas prticas com o desempenho econmico, ambiental e social. Para responder aos propsitos fixados para o estudo fez-se uso de uma abordagem qualitativa que integrou estudos de caso mltiplos, constitudos a partir de oito empresas de diferentes setores de atividade, que operam em Portugal, destinados a analisar as estratgias de sustentabilidade desenvolvidas e implementadas por essas das organizaes. Ao longo da investigao emprica, identificam-se as prticas ambientais e sociais implementadas nas empresas e nas suas cadeias de abastecimento e os diferentes indicadores que as mesmas utilizam para medio do seu desempenho. Nos casos analisados, so apresentadas evidncias de que a gesto sustentvel da cadeia de abastecimento requer das empresas a criao de mecanismos formais de cooperao entre os vrios membros da cadeia de abastecimento e de que existe uma relao entre a aplicao de prticas sustentveis e o desempenho econmico, ambiental e social.
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Phosphatidylserine (PS) is a member of the class of phospholipids, and is distributed among all cells of mammalians, playing important roles in diverse biological processes, including blood clotting and apoptosis. When externalized, PS is a ligand that is recognized on apoptotic cells. It has been considered that before externalization PS is oxidized and oxPS enhance the recognition by macrophages receptors, however the knowledge about oxidation of PS is still limited. PS, like others phospholipids, has two fatty acyl chains and one polar head group, in this case is the amino acid serine. The modifications in PS structure can occur by oxidation of the unsaturated fatty acyl chains and by glycation of the polar head group, due to free amine group, thus increasing the susceptibility to oxidative events. The main goal of this work was to characterize and identify oxidized and glycoxidized PS, contributing to the knowledge of the biological role of oxidation products of PS, as well as of glycated PS, in immune and inflammatory processes. To achieve this goal, PS standards (1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phospho- L-serine (POPS), 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine (DPPS), 1- palmitoyl-2-linoleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine (PLPS) and 1-palmitoyl-2- arachidonoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine (PAPS)) and glycated PS (PAPS and POPS) were induced to oxidize in model systems, using different oxidant reagents: HO and 2,2'-azobis-2-methyl-propanimidamide dihydrochloride (AAPH) . The detailed structural characterization of the oxidative products was performed by ESI-MS and MS/MS coupled to separation techniques such as off line TLC-MS and on line LC-MS, in order to obtained better characterization of the larger number of PS and glycated PS oxidation products. The results obtained in this work allowed to identify several oxidation products of PS and glycated PS with modifications in unsaturated fatty acyl chain. Also, oxidation products formed due to structural changes in the serine polar head with formation of terminal acetamide, terminal hydroperoxyacetaldehyde.and terminal acetic acid (glycerophosphacetic acid, GPAA) were identified. The mass spectrometric specific fragmentation pathway of each type of oxidation product was determined using different mass spectrometry approaches. Based on the identified fragmentation pathways, targeted lipidomic analysis was performed to detect oxidation products modified in serine polar head in HaCaT cell line treated with AAPH. The GPAA was detected in HaCaT cells treated with AAPH to induce oxidative stress, thus confirming that modifications in PS polar head is possible to occur in biological systems. Furthermore, it was found that glycated PS species are more prone to oxidative modifications when compared with non glycated PS. During oxidation of glycated PS, besides the oxidation in acyl chains, new oxidation products due to oxidation of the glucose moiety were identified, including PS advanced glycation end products (PSAGES). To investigate if UVA oxidative stress exerted changes in the lipidome of melanoma cell lines, particularly in PS profile, a lipidomic analysis was performed. The lipid profile was obtained using HILIC-LC-MS and GC-MS analysis of the total lipid extracts obtained from human melanoma cell line (SKMEL- 28) after UVA irradiation at 0, 2 and 24 hours. The results did not showed significant differences in PS content. At molecular level, only PS (18:0:18:1) decreased at the moment of irradiation. The most significant changes in phospholipids content occurred in phosphatidylcholines (PC) and phosphatidylinositol (PI) classes, with an increase of mono-unsaturated fatty acid (MUFA), similarly as observed for the fatty acid analysis. Overall, these data indicate that the observed membrane lipid changes associated with lipogenesis after UVA exposure may be correlated with malignant transformations associated with cancer development and progression. Despite of UVA radiation is associated with oxidative damage, in this work was not possible observe oxidation phospholipids. The anti/pro-inflammatory properties of the oxidized PLPS (oxPLPS) versus non-oxidized PLPS were tested on LPS stimulated RAW 264.7 macrophages. The modulation of intracellular signaling pathways such as NF-kB and MAPK cascades by oxPLPS and PS was also examined in this study. The results obtained from evaluation of anti/pro-inflammatory properties showed that neither PLPS or oxPLPS species activated the macrophages. Moreover only oxidized PLS were found to significantly inhibit NO production and iNOS and il1 gene transcription induced by LPS. The analysis at molecular level showed that this was the result of the attenuation of LPS-induced c-Jun-N-terminal kinase (JNK) and p65 NF-kB nuclear translocation. Overall these data suggest that oxPLPS, but not native PLPS, mitigates pro-inflammatory signaling in macrophages, contributing to containment of inflammation during apoptotic cell engulfment. The results obtained in this work provides new information on the modifications of PS, facilitating the identification of oxidized species in complex samples, namely under physiopathologic conditions and also contributes to a better understanding of the role of oxPS and PS in the inflammatory response, in the apoptotic process and other biological functions.
